血液、尿液中154种毒（药）物的测定液相色谱-串联质谱法SFZ JD0107005-2010（20100407）

1、全国人民代表大会常务委员会关于司法鉴定管理问题的决定(20051001)

2、司法鉴定程序通则（20160501）

3、司法鉴定执业分类规定(试行)（20000101)

4、人体损伤程度鉴定标准（20140101）

5、人体损伤致残程度分级（20170101）

6、GAT1193－2014人身损害误工期、护理期、营养期评定规范（20141126）

7、GBT16180-2014劳动能力鉴定职工工伤与职业病致残等级（20150101）

8、建设工程司法鉴定程序规范(20140317)

9、司法鉴定执业活动投诉处理办法(20100601)

10、公安机关鉴定人登记管理办法(20060301)

11、人民检察院鉴定规则（试行）(20070101)

12、人民法院对外委托司法鉴定管理规定(20020401)

中华人民共和国司法部司法鉴定管理局于2010年4月7日公告公布，自2010年4月7日起施行。

目   录

1范  围

2规范性引用文件

3原  理

4试剂和材料

5仪  器

6测定步骤

7结果计算

附录A（资料性附录） 154种毒药物的LC-MS/MS分析参数

1范 围

本标准规定了血液和尿液中154种毒（药）物（见附录A）的液相色谱一串联质谱（LC-MS/MS）检测方法。

本标准适用于血液和尿液中154种毒（药）物的筛选分析、定性和定量分析。

本标准血液中154种毒（药）物测定方法检出限为1-l0ng/mL（见附录A）。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）

GA/T 122 毒物分析名词术语

3原 理

本法利用154种常见毒（药）物可在中性、碱性条件下被有机溶剂从血、尿中提取出来的特点，用液相色谱一串联质谱法的多反应监测（MRM）模式进行检测，以保留时间、一对母离子/子离子对进行筛选分析；以保留时间和两对母离子/子离子对进行定性和定量分析。

4试剂和材料

除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 154种毒（药）物对照品溶液的制备

分别精密称取各种毒（药）物对照品适量，用甲醇配成lmg/mL的对照品储备溶液。置于-18⁰C冷冻保存，保存期为1年。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得，储存在4⁰C冰箱中，保存期为6个月。

4.2硼砂缓冲液

pH9.2。

4.3乙醚。

4.4乙睛

色谱纯。

4.5乙酸胺

色谱纯。

4.6甲酸

优级纯。

4.7流动相缓冲液

20mmo1/L乙酸铰和0.1%甲酸缓冲液：分别称取1.54g乙酸铰和1.84g甲酸置于1OOOmL容量瓶中，加水定容至刻度，pH值约为4。

5仪 器

5.1液相色谱一串联质谱联用仪

配有电喷雾离子源。

5.2分析天平

感量0.lmg。

5.3旋涡混合器。

5.4离心机。

5.5恒温水浴锅。

5.6移液器。

5.7具塞离心试管。

6测定步骤

6.1样品预处理

取血液或尿液1mL，加入2mL pH9.2硼砂缓冲液后用3.5mL乙醚提取，混旋，离心。上清液于60⁰C水浴中挥干，残留物中加入100uL乙睛：流动相缓冲液（70：30）进行溶解，取5uL注入LC-MS/MS。

6.2测定

6.2.1液相色谱一串联质谱条件

a）液相柱：Allure PFP Propyl 100mmx2.1mmx5um或相当者，接C_1s保护柱；

b）柱温：室温；

o）流动相：V（乙睛）：V（流动相缓冲液=70： 30；

d）流速：200uL/min ；

e）进样量：SQL；

幻离子源：电喷雾电离一正离子模式（ESI+）；

g）检测方式：多反应监测；

h）去簇电压（DP），碰撞能量（CE）等参数见附录A。

6.2.2筛选分析

筛选分析选取毒（药）物的一对母离子/子离子。离子驻留时间（Dwell Time）为5-10 ms，总循环时间2s。如果检出的色谱峰保留时间与附录A中某种常见毒（药）物的色谱峰保留时间比较，相对误差小于5%，且与空白检材添加该种对照品的色谱峰保留时间比较，相对误差小于2.5%，可以初步认为检材中含有某种常见毒（药）物，并进行确证分析。

确证分析选取毒（药）物的两对母离子/子离子（见附录A），离子驻留时间为200 ms。如果检出的色谱峰保留时间与空白检材添加对照品的色谱峰保留时间比较，相对误差小于2%，并且在扣除背景后的样品质谱图中，均出现所选择的离子对，而且所选择的离子对相对丰度比与添加对照品的离子对相对丰度比之相对误差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在这种化合物。

表1 相对离子对丰度比的最大允许相对误差（%）

6.2.3定量测定

采用外标一校准曲线法或单点法定量。用相同基质空白添加适量目标物对照品制得一系列校准样品，以目标物的的第1个母离子/子离子对峰面积对为纵坐标，添加浓度为横坐标绘制校准曲线，用校准曲线对检材进行定量。添加浓度应覆盖检材浓度范围。当空白检材中添加目标物浓度在检材中目标物浓度的士50%以内时，可采用单点校准法来计算目标化合物的浓度。

6.3平行试验

样品应按以上步骤同时平行测定两份。

平行试验中两份检材测定结果的双样相对相差若不超过20%时（腐败检材不超过30%），结果按两份检材浓度的平均值计算。双样相对相差按式（1）计算：

式中：

C₁、C₂——两份样品平行定量测定的结果；

——两份样品平行定量测定结果的平均值）（C₁+C₂）/2。

6.4空白试验

除以相同基质空白替代检材外，均按上述步骤进行。

7结果计算

以外标一校准曲线法或按式（2）计算：

式中：

C——被测样品中毒（药）物浓度C Cog/mL）；

A₁——检材中目标物的峰面积；

A₂——空白检材中添加目标物的峰面积；

W——空白检材中目标物的添加量（wg}；

W₁——检材量（mL）。

·附录A

（资料性附录）

154种毒药物的LC-MS/MS分析参数

表A 154种毒药物的LC-MS/MS分析参数

戴卫祥 律师

戴卫祥，辽宁东亚律师事务所律师、合伙人，专注于司法鉴定业务。2001年开始从事法律工作，具有丰富的法律理论和实践经验，尤其对刑事鉴定、伤残鉴定、机动车交通事故鉴定、痕迹物证鉴定、建设工程鉴定、消防鉴定等具有丰富的办案经验，积累了大量的成功案例。

戴卫祥律师联系方式

电话：13940919059

微信号码：dailvshi8

大连市中山区鲁迅路58号天通金融大厦1616

司法鉴定律师

长按识别二维码关注